TGF-β与Th类细胞因子的“对话”在泡球蚴感染所致宿主病理损伤中的作用机制研究

【摘要】目的：探讨TGF-p与Th类细胞因子的“对话”在泡球蚴感染所致宿主病理损伤中的作用。方法：1)肉眼直视下肝脏穿刺建立泡球蚴感染小鼠模型：8-10周龄雌性BALB/c小鼠,随机分为实验组和对照组。乙醚麻醉,实验组开腹直视下肝左叶注射0.1mL泡球蚴混悬液,丝线缝合关闭腹腔。对照组相同部位注射等量生理盐水。感染2、8、30、60、90、180、270、360天处死小鼠,两组均在肝左叶相同部位采集标本；2)采用36k小鼠全基因组寡核苷酸芯片分析BALB/c小鼠肝泡球蚴感染动物模型,肝脏基因mRNA转录本含量的改变；确定目标基因并联机检索GeneBank等整合数据库,按其生物功能进行分类。应用GeneCluster3.0生物信息可视化分析软件进行等级聚类分析。筛选肝脏免疫相关基因；3)泡球蚴病人和泡球蚴感染小鼠肝脏组织,福尔马林固定、石蜡包埋,4μm连续切片。HE染色观察病理变化,免疫组化方法、WesternBlot和实时荧光定量RT-PCR检测TGF-β1、Smads、MAPK、肝细胞增殖和凋亡相关蛋白及mRNA的表达与分布,原位末端标记技术(TUNEL)检测病灶肝细胞凋亡；4)原位肝脏灌注法分离大鼠肝细胞,与泡球蚴囊液共培养,15min、30min、1h、2h、24h收集细胞,WesternBlot检测TGF-β1、Smads、MAPK相关蛋白的表达。结果：1)随着泡球蚴感染时间的延长,肝损伤逐渐增加,肝纤维化程度增加,TGF-β1在泡球蚴感染所致的肝纤维化中具有促进作用；2)泡球蚴感染早期以Thl免疫反应为主,感染中期呈现出混合的Th1/Th2免疫反应,感染晚期免疫反应降低,化学趋化因子在泡球蚴感染过程中发挥着重要的作用,病灶旁肝组织促进了细胞因子和化学趋化因子的产生和活性；3)在泡球蚴感染早期,IL-17A和IL-17F在病灶炎性带组织和病灶旁肝组织中均高表达,感染晚期IL-17A表达低于对照组,而IL-17F的表达虽有所降低,但仍高于对照组；4)泡球蚴感染激活宿主肝细胞TGF-p/Smad信号通路,造成了肝纤维化；5)在泡球蚴感染的早期,以ERK1/2信号通路被激活,促进肝细胞的增殖；在感染的中期,以Gadd45β高表达,调控肝细胞的抗凋亡；在感染的晚期,以细胞凋亡蛋白p53、p21高表达,肝细胞发生生长抑制或凋亡。结论：1)泡球蚴感染TGF-P高表达,引起机体免疫抑制状态的形成,造成泡球蚴的“免疫逃避”,同时导致宿主肝脏发生病理性损伤；2)泡球蚴感染早期以Thl免疫反应为主,感染中晚期呈现出混合的Th1/Th2免疫反应,化学趋化因子在泡球蚴感染过程中也发挥着重要的作用,病灶旁肝组织促进了细胞因子和化学趋化因子的产生和活性；3)首次证明细胞因子和化学趋化因子,尤其是IL-17,在泡球蚴感染病灶旁炎性带和病灶旁肝组织发挥着重要的作用,结果提示TGF-β对IL-17不同的亚型表达及Treg具有调控作用,调节T细胞向特定方向分化,并诱导免疫细胞发生凋亡,从而介导泡球蚴的免疫逃避,同时造成宿主组织损伤；4)我们的研究结果的提示,在泡球蚴感染宿主肝脏过程中,泡球蚴感染引起宿主炎症反应或泡球蚴自身,分泌TGF-β及炎症／抗炎症细胞因子,激活下游Smad信号通路,从而导致宿主肝脏发生纤维化；5)在泡球蚴感染宿主肝脏的过程中,泡球蚴通过直接刺激(囊液中的有害成分、原头蚴本身分泌的某些成分)或间接(引起宿主免疫系统分泌的TGF-β及相关细胞因子)刺激,产生细胞毒性,造成宿主细胞应激反应,激活宿主肝细胞MAPK信号通路(ERK和JNK信号通路)和细胞周期相关调控因子,影响宿主肝细胞周期、引起宿主肝细胞增殖、生长抑制、凋亡和肝细胞功能改变等,最终导致宿主“肝肿大(感染早、中期)”或肝脏萎缩、变性甚至坏死(感染晚期)；6)在泡球蚴感染的早期,以ERK1/2-CyclinD1为主线的信号通路调控肝细胞的增殖；在感染的中期,以ERK1/2-Gadd45β(CyclinA)-PCNA为主线的信号通路调控肝细胞的抗凋亡；在感染的晚期,以p53-p21-Cyclins和p53-Gadd45y-JNK为主线的信号通路调控肝细胞的生长抑制或凋亡,从而造成宿主病理性肝损伤。
【作者】王俊华；
【导师】温浩；
【作者基本信息】新疆医科大学，外科学，2014，博士
【关键词】转化生长因子-β；Th类细胞因子；趋化因子；泡球蚴；肝纤维化；肝损伤；

【参考文献】
[1]阮泽文,顾海涛,史海浩,滕祥国,朱永明.动力锂离子电池三元正极材料LiNi_(1-x-y)Co_xAl_yO_2研究进展[J].功能材料,2015,01:1007-1015.
[2]郭靖.基于TCSP求解的RFID复杂事件处理[D].大连海事大学,计算机科学与技术,2013,硕士.
[3]李佳阳.专利制度下的遗传资源保护[D].河北经贸大学,民商法学,2013,硕士.
[4]郭恬然.互联网企业社会网络特征及其影响研究[D].山西师范大学,行政管理,2014,硕士.
[5]王媛媛.模板法合成介孔碳材料的研究[D].河北科技大学,化学工程与技术,2013,硕士.
[6]洪世杰.基于神经网络PID控制算法的起爆具生产线温度控制设计与开发[D].杭州电子科技大学,检测技术与自动化装置,2014,硕士.
[7]蒲奕冰.初级中亚留学生汉字书写偏误调查分析及对策[D].西北大学,汉语国际教育（专业学位）,2012,硕士.
[8]杨倩.BZ公司培训体系设计研究[D].北京交通大学,工商管理（专业学位）,2013,硕士.
[9]叶方舟.投资者情绪对美国证券市场横截面收益影响的实证研究[D].南京大学,金融学,2013,硕士.
[10]王全.双行星排式混合动力汽车构型分析及协调控制[D].吉林大学,车辆工程,2013,硕士.
[11]刘瀛.高效支持数据更新的XML编码[D].湖南师范大学,计算机软件与理论,2014,硕士.
[12]盛月红.基于动态图像序列的运动人体行为识别的研究[D].浙江理工大学,信号与信息处理,2013,硕士.
[13]马俊杰.无创正压通气机械臂的研究[D].哈尔滨工业大学,机械工程,2014,硕士.
[14]梅毓.基于DFL的agent的问题求解模型及其应用研究[D].苏州大学,计算机应用技术,2003,硕士.
[15]徐玲艳.名老中医沈炎南学术思想及医案整理[D].广州中医药大学,中医学,2013,硕士.
[16]赵平.掺铥光纤激光器的优化设计与分析[D].湖南大学,信息与通信工程,2011,硕士.
[17]王安苓.燃煤发电厂湿烟囱防腐耐磨涂层研究[D].合肥工业大学,材料学,2014,硕士.
[18]韩莉.基于概念格的Web使用日志挖掘及其在个人化技术中的应用[D].安徽大学,2003.
[19]徐晓航.含氟的β-酮亚胺和β-二亚胺铜配合物的合成、表征以及催化性能研究[D].中南民族大学,高分子化学与物理,2013,硕士.
[20]朱群红.简支楔形变截面工字钢梁的弹性弯扭屈曲[D].浙江大学,结构工程,2004,硕士.
[21]夏自卫.索债型非法拘禁行为的刑法问题[D].湘潭大学,法律,2003,硕士.
[22]李明银.高二适书法艺术研究[D].河北大学,美术学,2014,硕士.
[23]沙美华.用于激光扫描的语音控制系统的研究与开发[D].天津大学,机械制造及其自动化,2004,硕士.
[24]王浩.项目教学法在小学科学课程教学中的应用研究[D].宁夏大学,教育（专业学位）,2014,硕士.
[25]张芷英.基于片上网络的动态部分可重构系统研究[D].复旦大学,微电子学与固体电子学,2012,硕士.
[26]袁松.基于Windows CE的倍捻机人机交互系统[D].浙江理工大学,机械电子工程,2013,硕士.
[27]刘焕.德里达：解构海德格尔的“精神”规定[D].中国政法大学,外国哲学,2013,硕士.
[28]朱盼盼.低维自旋阻挫系统磁学性质和磁热效应的研究[D].东北大学,原子与分子物理,2010,硕士.
[29]黄妍.中国近代学前教育师资培养与管理研究[D].西南大学,学前教育学,2013,硕士.
[30]李涛.“海派清口”喜剧效果的话语分析[D].温州大学,语言学及应用语言学,2012,硕士.
[31]汪正勇.高速公路合流区上下游交通流量特性分析及预测研究[D].重庆大学,控制科学与工程,2014,硕士.
[32]何随彬.鸡毒支原体两种膜相关糖酵解酶的生物学功能研究[D].南京农业大学,预防兽医学,2013,硕士.
[33]胡晓丽.垂体瘤的临床病理诊断及分类诊断的价值评估[D].郑州大学,内科学,2011,硕士.
[34]黄达顺.初中语文合作学习的探讨[D].福建师范大学,教育,2003,硕士.
[35]刘丹红,徐勇勇.病情危重度评价及其在病种质理管理中的应用[J].中国医院管理,2003,09:31-33.
[36]杨文.波伏娃女性主义视角下小说《无主之家》中的女性形象研究[D].四川外国语大学,德语语言文学,2013,硕士.
[37]孔琳琳.基于Hilbert-Huang的高压输电线路故障诊断研究[D].西安科技大学,电气工程,2014,硕士.
[38]张俊龙.网格环境下基于QoS的铁路信息服务组合优化研究[D].北京交通大学,系统工程,2013,硕士.
[39]王艳萍.移动Web客户端持久化缓存技术研究[D].华中科技大学,计算机技术,2013,硕士.
[40]付友健.基于循环放大技术细胞内小分子活性物质的检测[D].青岛科技大学,2013.
[41]郭力.房地产开发项目的精细化管理研究[D].天津大学,工程管理,2013,硕士.
[42]黄方.在线词汇学习与传统词汇学习对非英语专业大学生英语词汇学习影响的实验研究[D].中北大学,英语语言文学,2014,硕士.
[43]冀鑫如.基于静息状态fMRI的ADHD复杂脑网络分析[D].北京交通大学,2015.
[44]彭滋晟.拓扑绝缘化掺杂Bi_2Se_3的电热输运特性及其单晶生长工艺研究[D].武汉理工大学,2011.
[45]许雯.苏南地区小城镇绿地系统规划研究[D].苏州大学,设计艺术学,2014,硕士.
[46].浙江大学中国艺术研究所[J].浙江大学学报(人文社会科学版),2014,04:2.
[47]崔官哲.违法所得没收程序若干问题研究[D].吉林大学,法律,2013,硕士.
[48]赵悦,周利民,傅冬梅.基于数据仓库和OLAP的移动通信决策支持系统[J].计算机系统应用,2002,04:10-13.
[49]康晓琴.贵州省农村公共服务供给机制的研究[D].贵州财经大学,财政学,2013,硕士.
[50]陈钊.基于柔性轴的压缩机轴承—转子系动力学摩擦学耦合性能研究[D].华中科技大学,动力机械及工程,2013,硕士.